Posted by on 1 listopada 2018

Czystość receptorów sprawdzono za pomocą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem-poliakryloamidem i związanie z [3H] kwasem foliowym (aktywność właściwa, 31 Ci na milimol; Moravek), jak opisano poprzednio4. Próbki osocza lub surowicy od matek kontrole zakwaszono do pH 3,0 0,1 M buforem glicynowym, a folian usunięto przez adsorpcję do węgla drzewnego pokrytego dekstranem. Supernatant wolny od kwasu foliowego neutralizowano M dwuzasadowym fosforanem sodu i stosowano w testach w celu określenia obecności autoprzeciwciał receptora folanowego. Test na autoprzeciwciała blokujące wiązanie kwasu foliowego z receptorami kwasu foliowego przeprowadzono w sposób opisany uprzednio. 4,5 Krótko, 30 .l supernatantu surowicy lub supernatantu surowicy bez folanu inkubowano przez noc w 4 ° C z 0,01 M buforem fosforanu sodu ( pH 7,4) zawierającego 0,5% Triton X-100 i 0,18 pmol oczyszczonego receptora, w objętości 500 .l. [3H] kwas foliowy dodano i mieszaninę inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Wolny kwas [3H] kwasu foliowego usunięto przez adsorpcję na węglu drzewnym i zmierzono radioaktywność w supernatancie zawierającym receptor [3H] kwas foliowy. Miano autoprzeciwciał obliczono ze zmniejszenia radioaktywności w porównaniu z reakcją równoległą bez ekstraktu surowicy. Te wyniki autoprzeciwciał blokujących wyrażono jako pikomoli receptora folanu zablokowanego na mililitr surowicy lub osocza.
Do oznaczenia obecności IgG związanego z epitopami na oczyszczonych receptorach folanowych wykorzystano test ELISA. 6 W tym teście oczyszczone receptory folanu z mleka krowiego lub ludzkiej tkanki łożyskowej unieruchomiono na 96-studzienkowych płytkach. Strony niezwiązane zostały zablokowane surowicą króliczą. Dodano próbki wolnej od kwasu foliowego lub supernatantów surowicy i inkubowano przez noc w 4 ° C. Obecność autoprzeciwciał wykrywano przez kompleksowanie z kozimi przeciwciałami przeciw ludzkiej IgG sprzężonymi z biotyną, a następnie przez dodanie kompleksu awidyna-biotyna-peroksydaza i reakcję kolorymetryczną z tetrametylobenzydyną. Miano autoprzeciwciała określono ilościowo za pomocą standardowej krzywej dla znanych ilości ludzkiej IgG wychwyconej w płytce ELISA powleczonej białkiem A i reakcji kolorymetrycznej z tetrametylobenzydyną. Niespecyficzne wiązanie określono w laboratoryjnych próbkach kontrolnych, a wartość 2 SD powyżej średniej uznawano za reprezentującą niespecyficzne wiązanie. Ta wartość została odjęta od wartości dla wszystkich badanych próbek. Te dane dotyczące wiązania autoprzeciwciał wyrażono jako pikomole IgG na mililitr surowicy lub osocza.
Testy autoprzeciwciał wykorzystywały receptory folanu z mleka krowiego jako antygen w badaniu i ludzkie receptory folanu łożyska jako antygen w badaniu 2. Jak wykazano wcześniej, 6 występował wysoki stopień reaktywności krzyżowej między ludzkimi receptorami folanu łożyska a krowią. receptory folianów mleka, ze współczynnikiem korelacji (r) wynoszącym 0,82 w teście ELISA. W celu potwierdzenia nowego testu ELISA oceniano dostępne próbki surowicy z pięciu kontroli negatywnych w przypadku autoprzeciwciał i siedmiu osób z indeksem, które były pozytywne w stosunku do autoprzeciwciał z pierwotnego badania2. Nowy test ELISA wykazał, że wszystkie próbki od pierwotnych uczestników indeksu pozostały pozytywne, a wszystkie próbki z kontroli pozostawały ujemne
[przypisy: ośrodek terapii uzależnień warszawa, pestka moreli gorzkiej, badanie kału cena ]

Powiązane tematy z artykułem: badanie kału cena ośrodek terapii uzależnień warszawa pestka moreli gorzkiej

Posted by on 1 listopada 2018

Czystość receptorów sprawdzono za pomocą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem-poliakryloamidem i związanie z [3H] kwasem foliowym (aktywność właściwa, 31 Ci na milimol; Moravek), jak opisano poprzednio4. Próbki osocza lub surowicy od matek kontrole zakwaszono do pH 3,0 0,1 M buforem glicynowym, a folian usunięto przez adsorpcję do węgla drzewnego pokrytego dekstranem. Supernatant wolny od kwasu foliowego neutralizowano M dwuzasadowym fosforanem sodu i stosowano w testach w celu określenia obecności autoprzeciwciał receptora folanowego. Test na autoprzeciwciała blokujące wiązanie kwasu foliowego z receptorami kwasu foliowego przeprowadzono w sposób opisany uprzednio. 4,5 Krótko, 30 .l supernatantu surowicy lub supernatantu surowicy bez folanu inkubowano przez noc w 4 ° C z 0,01 M buforem fosforanu sodu ( pH 7,4) zawierającego 0,5% Triton X-100 i 0,18 pmol oczyszczonego receptora, w objętości 500 .l. [3H] kwas foliowy dodano i mieszaninę inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Wolny kwas [3H] kwasu foliowego usunięto przez adsorpcję na węglu drzewnym i zmierzono radioaktywność w supernatancie zawierającym receptor [3H] kwas foliowy. Miano autoprzeciwciał obliczono ze zmniejszenia radioaktywności w porównaniu z reakcją równoległą bez ekstraktu surowicy. Te wyniki autoprzeciwciał blokujących wyrażono jako pikomoli receptora folanu zablokowanego na mililitr surowicy lub osocza.
Do oznaczenia obecności IgG związanego z epitopami na oczyszczonych receptorach folanowych wykorzystano test ELISA. 6 W tym teście oczyszczone receptory folanu z mleka krowiego lub ludzkiej tkanki łożyskowej unieruchomiono na 96-studzienkowych płytkach. Strony niezwiązane zostały zablokowane surowicą króliczą. Dodano próbki wolnej od kwasu foliowego lub supernatantów surowicy i inkubowano przez noc w 4 ° C. Obecność autoprzeciwciał wykrywano przez kompleksowanie z kozimi przeciwciałami przeciw ludzkiej IgG sprzężonymi z biotyną, a następnie przez dodanie kompleksu awidyna-biotyna-peroksydaza i reakcję kolorymetryczną z tetrametylobenzydyną. Miano autoprzeciwciała określono ilościowo za pomocą standardowej krzywej dla znanych ilości ludzkiej IgG wychwyconej w płytce ELISA powleczonej białkiem A i reakcji kolorymetrycznej z tetrametylobenzydyną. Niespecyficzne wiązanie określono w laboratoryjnych próbkach kontrolnych, a wartość 2 SD powyżej średniej uznawano za reprezentującą niespecyficzne wiązanie. Ta wartość została odjęta od wartości dla wszystkich badanych próbek. Te dane dotyczące wiązania autoprzeciwciał wyrażono jako pikomole IgG na mililitr surowicy lub osocza.
Testy autoprzeciwciał wykorzystywały receptory folanu z mleka krowiego jako antygen w badaniu i ludzkie receptory folanu łożyska jako antygen w badaniu 2. Jak wykazano wcześniej, 6 występował wysoki stopień reaktywności krzyżowej między ludzkimi receptorami folanu łożyska a krowią. receptory folianów mleka, ze współczynnikiem korelacji (r) wynoszącym 0,82 w teście ELISA. W celu potwierdzenia nowego testu ELISA oceniano dostępne próbki surowicy z pięciu kontroli negatywnych w przypadku autoprzeciwciał i siedmiu osób z indeksem, które były pozytywne w stosunku do autoprzeciwciał z pierwotnego badania2. Nowy test ELISA wykazał, że wszystkie próbki od pierwotnych uczestników indeksu pozostały pozytywne, a wszystkie próbki z kontroli pozostawały ujemne
[przypisy: ośrodek terapii uzależnień warszawa, pestka moreli gorzkiej, badanie kału cena ]

Powiązane tematy z artykułem: badanie kału cena ośrodek terapii uzależnień warszawa pestka moreli gorzkiej